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硅胶色谱柱的使用和储存说明

更新时间:2023-01-06      点击次数:3895
硅胶因其优良的机械强度和表面易改性等特征,已成为应用广泛的色谱柱填料。硅胶柱具有柱效高、选择性好及分析速度快等特点,因而被广泛用于分离极性小分子如药物,而用于糖、肽或蛋白质分离较少。
 
硅胶色谱柱主要是通过硅胶的硅羟基吸附能力进行物质的分离,填充颗粒主要是硅胶,所用溶剂常见的是乙酸乙酯,石油醚,不能使用水,对于极性差别比较大的物质分离效果好。
 
硅胶色谱柱使用方法:
 
1、称量
200-300目硅胶,称30-70倍于上样量;如果极难分,也可以用100倍量的硅胶H。干硅胶的视密度在0.4左右,所以要称40g硅胶,用烧杯量100ml也可以。
 
2.搅成匀浆
加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系,就用石油醚拌。
 
3.装柱
将柱底用棉花塞紧,不*海沙,加入约1/3体积石油醚,装上蓄液球,打开柱下活塞,将匀浆一次倾入蓄液球内。随着沉降,会有一些硅胶沾在蓄液球内,用石油醚将其冲入柱中。
 
4.压实
沉降完成后,加入更多的石油醚,用双联球或气泵加压,直至流速恒定。柱床约被压缩至9/10体积。无论走常压柱或加压柱,都应进行这一步,可使分离度提高很多,且可以避免过柱时由于柱床产生开裂。
 
5.上样
干法湿法都可以。海沙是没必要的。上样后,加入一些洗脱剂,再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面。然后就可以放心地加入大量洗脱剂,而不会冲坏硅胶表面。
 
6.过柱和收集
柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡。太低的洗脱强度并不好,推荐用梯度洗脱。收集的例子:10mg上样量,1g硅胶H,0.5ml收一馏分;1-2g上样量,50g硅胶(200-300目),20-50ml收一馏分。
 
7.检测
要更多地使用专用喷显剂,如果仅用紫外灯,会损失较多产品,紫外的灵敏度一般比喷显剂低1-2个数量级。
 
8.送谱
收集的产品旋干,在送谱前通常需要重结晶。如果样品太少或为液体,可过一小凝胶柱,作为送谱前的最后纯化手段。可除去氢谱1.5ppm左右所谓的“硅胶”峰。
 
高纯硅胶色谱柱的储存方法:
 
1、避免用纯净水冲洗键合致密的C18柱。
2、防止缓冲溶液和水溶液流动相产生微生物,做到流动相用多少配多少,或在水流动相中加200ppm的叠氮钠以抑制细菌成长或在流动相中加20%的有机改性剂,也可抑制微生物生长,有机改性剂还有助于流动相脱气。
3、使用缓冲溶液后的产品,应用15~20倍柱体积的不含缓冲剂的同种水—有机溶剂流动相冲洗色谱柱,后换成有机溶剂储存。
4、将两端用堵头拧好,以免柱床填料干裂。
5、尽可能将色谱柱贮存于*有机溶剂中,避免在缓冲溶液中保存。

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